Nível de transcrição relativa de BMP15, BAX e CASP3 determinado pelo qRT-PCR em complexos cumulus-oócitos imaturos vitrificados de equinos

Autores

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2022v43n3p927

Palavras-chave:

Proteína X associada a Bcl-2, Proteína morfogenética óssea 15, Expressão genética, Caspase 3, Equinos.

Resumo

Pesquisas sobre a vitrificação de gametas femininos estão sendo realizadas para o desenvolvimento de um método confiável de criopreservação dos complexos cumulus-oócitos (CCOs) na espécie equina. Apesar da implementação intensiva de biotecnologias reprodutivas em equinos, a vitrificação dos CCOs imaturos permanece em estágio experimental em relação à competência celular. O objetivo do estudo foi determinar o nível de transcrição relativo dos genes Proteína morfogenética óssea 15 (BMP15); Proteína X associada a Bcl-2 (BAX); e Caspase 3 (CASP3) em CCOs equinos antes e após a vitrificação. Folículos ovarianos foram aspirados de ovários coletados em matadouro. O total de 240 CCOs foi coletado e distribuído em grupos vitrificados (VIT, n=120) e não vitrificados (N-VIT, n=120). Os CCOs foram preservados e as expressões transcritas relativas de BMP15, BAX, CASP3 foram determinadas pela técnica de qRT-PCR sendo normalizadas em relação ao GAPDH. Além disso, 38 CCOs foram avaliados para determinar a configuração da cromatina no estágio de vesícula germinativa antes e após a vitrificação pela exposição a 10 ug/ml de bisbenzimida. Os resultados mostraram uma diferença no nível de abundância de mRNA dos CCOs para o gene BAX entre os grupos VIT (2,05 ± 0,47) e N-VIT (0,85 ± 0,08). Não houve diferença no nível de transcrição relativa do mRNA de CASP3 e BMP15 nos CCOs do grupo N-VIT (0,63 ± 0,20 e 1,55 ± 0,73, respectivamente) em comparação com VIT (0,64 ± 0,01 e 2,84 ± 2,20, respectivamente). Todos os CCOs foram considerados em estágio imaturo de desenvolvimento, embora os CCOs no grupo N-VIT apresentaram a configuração de cromatina condensada em maior número de células avaliadas em comparação com VIT (100% vs 60,7%, respectivamente). Demonstramos que BMP15 e CASP3 são detectados em CCOs imaturos em VIT e N-VIT. Conclui-se que o BAX é altamente expresso em CCOs equinos imaturos vitrificados sendo relacionado à sinalização de apoptose em células expostas ao processo de vitrificação.

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Biografia do Autor

Mauro Flores Polenz, Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Programa de Pós-Graduação em Medicina Equina, Escola de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil.

Gabriel Ribas Pereira, Universidade Federal do Rio Grande do Sul

Programa de Pós-Graduação em Zootecnia, NESPro, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil.

Vitor Braga Rissi, Universidade Federal de Santa Maria

Laboratório de Biotecnologia e Reprodução Animal - BioRep, Universidade Federal de Santa Maria, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil.

Kalyne Bertolin, Universidade Federal de Santa Maria

Laboratório de Biotecnologia e Reprodução Animal - BioRep, Universidade Federal de Santa Maria, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil.

Paulo Bayard Gonçalves, Universidade Federal de Santa Maria

Laboratório de Biotecnologia e Reprodução Animal - BioRep, Universidade Federal de Santa Maria, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil.

Geovani Celso Augusto, In Vitro Brasil Ltda

In Vitro Brasil Ltda, Departamento de Clonagem Animal, Mogi Mirim, SP, Brasil.

Sandra Mara Fiala Rechsteiner, Universidade Federal de Pelotas

Historep - Departamento de Morfologia, Instituto de Biologia, Universidade Federal de Pelotas, UFPel, Pelotas, RS, Brasil.

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Publicado

2022-02-28

Como Citar

Polenz, M. F., Pereira, G. R., Rissi, V. B., Bertolin, K., Gonçalves, P. B., Augusto, G. C., & Rechsteiner, S. M. F. (2022). Nível de transcrição relativa de BMP15, BAX e CASP3 determinado pelo qRT-PCR em complexos cumulus-oócitos imaturos vitrificados de equinos. Semina: Ciências Agrárias, 43(3), 927–942. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2022v43n3p927

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