Técnicas para avaliação espermática utilizando sondas fluorescentes

Autores

  • Andrielle Thainar Mendes Cunha Universidade de Brasília
  • José Oliveira Carvalho Universidade Estadual de São Paulo
  • Margot Alves Nunes Dode Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologias

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2015v36n6Supl2p4365

Palavras-chave:

Microscopia de fluorescência, Espermatozóide, Criopreservação.

Resumo

Diversos testes laboratoriais têm sido desenvolvidos com o intuito de obter resultados confiáveis nas avaliações espermáticas, aumentando a qualidade e a confiabilidade do sêmen utilizado em técnicas de reprodução assistida. Esses testes têm permitido detectar danos em compartimentos e organelas específicas da célula espermática, que não são detectados nas análises de rotina. Dentre esses testes, o uso de sondas fluorescentes e sua detecção em microscópio de epifluorescência ou citometria de fluxo se tornaram ferramenta importante quando uma avaliação mais acurada é necessária. Para a avaliação da integridade de membrana plasmática, pode ser utilizado o iodeto de propídio, associado ao diacetato de 6-carboxifluoresceína. As avaliações de integridade acrossomal podem ser feitas através do isotiocianato de fluoresceína, associado às lecitinas conjugadas, como a Psium sativum ou Arachis hypogaea. O potencial mitocondrial pode ser avaliado quanto à ausência ou presença através da sonda Mitotracker ou Rodamina 123. Outra opção ainda melhor pode ser observada utilizando o corante iodeto de 5,5’; 6,6’ – tetracloro – 1,1’; 3,3’ – tetraetilbenzimidazolil-carbocianina (JC-1), este corante avalia a presença do potencial mitocondrial e avalia quanto à classificação do grau. Para avaliar a integridade de cromatina, pode ser empregado o uso de duas técnicas conhecidas como TUNEL ou COMETA, ou pode ser utilizado o corante Acridine Orange Test (AOT). Para avaliar se o espermatozoide está passando ou passou pelo processo de capacitação, pode ser utilizada a técnica de fluorescência a base de clortetraciclina, o CTC, quelante do cálcio, ou a Merocianina 540. Esta revisão enfatiza as principais sondas fluorescentes disponíveis para avaliar a integridade de membrana plasmática, capacitação, integridade acrossomal, integridade da cromatina, e potencial mitocondrial.

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Biografia do Autor

Andrielle Thainar Mendes Cunha, Universidade de Brasília

Discente, Universidade de Brasília, UnB, Brasília, DF, Brasil. 

José Oliveira Carvalho, Universidade Estadual de São Paulo

Discente, Universidade de São Paulo, USP, Piracicaba, SP, Brasil.

Margot Alves Nunes Dode, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologias

Pesquisadora, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Brasília, DF, Brasil. 

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Publicado

2015-12-16

Como Citar

Cunha, A. T. M., Carvalho, J. O., & Dode, M. A. N. (2015). Técnicas para avaliação espermática utilizando sondas fluorescentes. Semina: Ciências Agrárias, 36(6Supl2), 4365–4376. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2015v36n6Supl2p4365

Edição

Seção

Artigos de revisões