Otimização da reação em cadeia pela polimerase (Semi Nested-PCR) para a detecção do herpesvírus bovino tipo 1 em fragmentos de órgãos fetais e em sêmen de bovinos naturalmente infectados

Autores

  • Elisabete Takiuchi Universidade Estadual de Londrina
  • Kerlei Cristina Médici Universidade Estadual de Londrina
  • Fernandes Alfieri Universidade Estadual de Londrina
  • Amauri Alcindo Alfieri Universidade Estadual de Londrina

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2003v24n1p43

Palavras-chave:

Bovino, Herpesvírus bovino tipo 1, Diagnóstico, PCR, Aborto, Sêmen.

Resumo

A reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi empregada para a detecção parcial do gene da glicoproteína D do herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) em material biológico proveniente de bovinos naturalmente infectados. Para o aumento da sensibilidade e da especificidade da PCR, foram avaliados diferentes protocolos. Para a extração do DNA, a associação dos métodos fenol/clorofórmio/álcool isoamílico e sílica/tiocianato de guanidina, proporcionou a amplificação do DNA em maior concentração e qualidade. Após a otimização dos primers e condições da reação foi possível detectar, por meio da Semi Nested-PCR (SN-PCR), o genoma da estirpe Los Angeles do BHV-1 em sobrenadante de cultura celular, sem processamento prévio, até o limite de 1 TCID50. Em sêmen artificialmente infectado o limite de detecção do BHV-1 foi de 0,1 TCID50. Quando utilizada em material biológico, proveniente de bovinos naturalmente infectados, a SN-PCR apresentou resultados positivos tanto em fragmentos de órgãos de fetos bovinos abortados quanto em sêmen. Essa técnica revelou-se uma alternativa viável, rápida, sensível e específica para aplicação na rotina de diagnóstico da infecção pelo BHV-1, bem como, para o monitoramento sanitário do sêmen.

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Biografia do Autor

Elisabete Takiuchi, Universidade Estadual de Londrina

Aluna do Programa de Pós-graduação em Ciência Animal (Área de Concentração: Sanidade Animal; Nível: Mestrado) / Universidade Estadual de Londrina (UEL).

Kerlei Cristina Médici, Universidade Estadual de Londrina

Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Agrárias, UEL, cx. postal 6001, Londrina/PR.

Fernandes Alfieri, Universidade Estadual de Londrina

Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Agrárias, UEL, cx. postal 6001, Londrina/PR.

Amauri Alcindo Alfieri, Universidade Estadual de Londrina

Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Agrárias, UEL, cx. postal 6001, Londrina/PR.

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Publicado

2003-05-10

Como Citar

Takiuchi, E., Médici, K. C., Alfieri, F., & Alfieri, A. A. (2003). Otimização da reação em cadeia pela polimerase (Semi Nested-PCR) para a detecção do herpesvírus bovino tipo 1 em fragmentos de órgãos fetais e em sêmen de bovinos naturalmente infectados. Semina: Ciências Agrárias, 24(1), 43–56. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2003v24n1p43

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