Obtenção de mutantes de Aspergillus carbonarius via transformação genética mediada por Agrobacterium tumefaciens

Lígia Uno Lunardi, Carla Beatriz Fier, Fernando Yuldi Ashikaga, Luiz Rodrigo Morioka, Maria Helena Pelegrinelli Fungaro

Resumo


Aspergillus carbonarius é um potente produtor de ocratoxina A, uma toxina que apresenta efeitos nefrotóxico e carcinogênico. O conhecimento de genes envolvidos em sua biossíntese pode contribuir para o desenvolvimento de medidas de controle. O método de transformação genética mediado por Agrobacterium tumefaciens tem sido demonstrado como uma importante ferramenta para a obtenção de mutantes insercionais visando à caracterização de novos genes. O objetivo deste trabalho foi adequar o método de transformação genética via A. tumefaciens para a linhagem ITAL187 de A. carbonarius e obter mutantes alterados para a produção de ocratoxina A. Conídios foram transformados para resistência a higromicina B usando a linhagem AGL-1 de A. tumefaciens. A freqüência média de transformação foi de 20,04 transformantes por 105 conídios-alvo. A prova física da transformação foi obtida pela detecção do gene hph por PCR e Southern Blot. Esta última demonstrou que a integração do DNA exógeno ocorreu de forma aleatória no genoma fúngico. Dentre 238 transformantes, 12 (5,042%) mostraram variações morfológicas. Três mutantes (T44, T47 e T188) com significativa redução e dois mutantes (T238 e T162) com aumento da capacidade de produção de ocratoxina A foram obtidos. A identificação dos genes nocauteados contribuirá para a compreensão da biossíntese desta toxina.


Palavras-chave


Aspergillus carbonarius; Ocratoxina A; Agrobacterium tumefaciens; Transformação genética; Mutantes insercionais.

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DOI: http://dx.doi.org/10.5433/1679-0367.2006v27n2p95

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