Confirmação da indução da hexaploidia do alotriploide “Híbrido de Timor” ‘CIFC 4106’ por contagem cromossômica

Autores

  • Natália Arruda Sanglard Universidade Federal do Espírito Santo
  • Paulo Marcos Amaral-Silva Universidade Federal do Espírito Santo
  • Stéfanie Cristina de Oliveira Universidade Federal do Espírito Santo
  • Mariana Cansian Sattler Universidade Federal de Viçosa
  • Carlos Roberto Carvalho Universidade Federal de Viçosa
  • Wellington Ronildo Clarindo Universidade Federal do Espírito Santo

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0367.2017v38n1suplp140

Palavras-chave:

Coffea, citogenética, duplicação cromossômica

Resumo

As diversas estratégias empregadas para indução da duplicação cromossômica geram indivíduos com diferentes ploidias, inclusive mixoploides. Nesse sentido, é fundamental o uso de métodos que distinguem esses indivíduos. Dentre os métodos diretos, o único que inequivocamente confirma o nível de ploidia é a contagem cromossômica. Dessa forma, o presente trabalho tem por objetivo determinar o número cromossômico de alotriploides e hexaploides putativos oriundos da indução da duplicação cromossômica do alotriploide Híbrido de Timor (HT) ‘CIFC 4106’ (Coffea arabica x Coffea canephora). 48 plântulas foram regeneradas a partir de um novo procedimento, envolvendo calos embriogênicos friáveis tratados com colchicina (0,5; 1,5 ou 2,5 mM) por 96 h. A citometria de fluxo (CF) foi realizada a partir de fragmentos foliares dos indivíduos regenerados, pré-selecionando os alotriploides e os supostos hexaploides. Meristemas radiculares desses indivíduos foram tratados com 90 µM de ciclohexamida e 4 µM amiprofos-metil durante 1 h 45 min a 25ºC, e macerados em pool enzimático (celulase 4%, macerozime 1% e hemicelulase 0,4%) por 2 h a 34ºC. Em lâminas preparadas por dissociação celular e secagem ao ar, metáfases com 2n=3x=33 e com 2n=6x=66 cromossomos foram encontradas. A técnica empregada permitiu a obtenção de cromossomos bem espalhados na lâmina, garantindo uma contagem precisa do número de cromossomos. O procedimento citogenético foi primordial em virtude do elevado número de cromossomos, uma vez que, a técnica de esmagamento amplamente empregada, possivelmente resultaria em cromossomos sobrepostos. A CF possibilitou o screening de muitas plântulas em um curto período de tempo, mas a contagem cromossômica foi primordial para a determinação do nível de ploidia, uma vez que, pequenas alterações aneuploides podem não ser detectadas pelo citômetro de fluxo. Por se tratar de um experimento conduzido in vitro, a obtenção de cromossomos metafásicos é favorecida pela alta taxa proliferativa do material biológico, aliado a uma padronização refinada dos pré-tratamentos citogenéticos. O resultado da CF corroborou com a citogenética, permitindo avaliar o nível de ploidia a partir de diferentes tecidos, folhas e raízes, respectivamente. Dessa forma, a determinação do número de cromossomos deve ser parte indispensável do rigor experimental em experimentos de duplicação cromossômica.

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Biografia do Autor

Natália Arruda Sanglard, Universidade Federal do Espírito Santo

Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos, Universidade Federal do Espírito Santo, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Biologia, Alegre-ES

Paulo Marcos Amaral-Silva, Universidade Federal do Espírito Santo

Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos, Universidade Federal do Espírito Santo, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Biologia, Alegre-ES

Stéfanie Cristina de Oliveira, Universidade Federal do Espírito Santo

Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos, Universidade Federal do Espírito Santo, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Biologia, Alegre-ES

Mariana Cansian Sattler, Universidade Federal de Viçosa

Laboratório de Citogenética e Citometria, Universidade Federal de Viçosa, Centro de Ciências Biológicas e da Saúde, Departamento de Biologia Geral, Viçosa-MG

Carlos Roberto Carvalho, Universidade Federal de Viçosa

Laboratório de Citogenética e Citometria, Universidade Federal de Viçosa, Centro de Ciências Biológicas e da Saúde, Departamento de Biologia Geral, Viçosa-MG

Wellington Ronildo Clarindo, Universidade Federal do Espírito Santo

Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos, Universidade Federal do Espírito Santo, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Biologia, Alegre-ES

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Publicado

2018-02-16

Como Citar

1.
Sanglard NA, Amaral-Silva PM, Oliveira SC de, Sattler MC, Carvalho CR, Clarindo WR. Confirmação da indução da hexaploidia do alotriploide “Híbrido de Timor” ‘CIFC 4106’ por contagem cromossômica. Semin. Cienc. Biol. Saude [Internet]. 16º de fevereiro de 2018 [citado 29º de março de 2024];38(1supl):140. Disponível em: https://ojs.uel.br/revistas/uel/index.php/seminabio/article/view/29478