Avaliação da coluna de imunoafinidade em desenvolvimento para detecção de aflatoxina B1 por espectrofluorimetria.

Resumo

O monitoramento de aflatoxina B1 depende de métodos analíticos rápidos de alta sensibilidade e especificidade. Considerando que a coluna de imunoafinidade (CIA) é essencial na etapa de limpeza e pré-concentração do analito, o trabalho objetivou desenvolver CIA empregando IgG anti-AFB1 produzido pelo hibridoma linhagem AF4, imobilizado em suporte gel ativado Affi-Gel 10. A eficiência de CIA em desenvolvimento foi comparada com CIA comercial perante detecção de AB1 em milho por espectrofluorimetria (? de excitação e emissão de 360 e 420 nm, respectivamente). O anticorpo monoclonal (AcM) anti-AFB1 produzido foi semi-purificado (82,18 ?g/mL) e utilizado na confecção da CIA. Testando a recuperação de AFB1 em milho artificialmente contaminado com 5, 15 e 30 ng de AFB1/g, a coluna desenvolvida não foi eficaz (188,67%), se comparado a CIA comercial Aflatest-P (recuperação de AFB1 de 72,40 a 79,77%). A reutilização após regeneração de coluna comercial mostrou resultados variáveis, com 34,15 a 82,88% de recuperação de AFB1, indicando significativo erro na análise. Embora estes sejam dados preliminares, a redução de solventes tóxicos e possibilidade de reutilização justificam o desenvolvimento de CIA com melhoria direcionada principalmente ao capeamento, visando obter coluna específica, capaz de limpar o extrato alimentar em única etapa cromatográfica.